Übersicht
PTI RatioMaster ist ein monochromatorisches Großfeldmikroskopsystem zur Messung der Fluoreszenz- oder Fluoreszenzfarbstoffintensität von markierten Proteinen in nanomolaren Konzentrationen. Die Ratio-Fluoreszenzmikroskopie ist das ultimative Werkzeug zur Untersuchung dynamischer Ereignisse in lebenden Zellen und Zellstrukturen. Im Gegensatz zur herkömmlichen intensitätsbasierten Fluoreszenzmikroskopie eliminiert die Verhältnisfluoreszenz die Auswirkungen von Photobleiche, Zellweglängenvariation, Ungleichmäßigkeit der Farbstoffbeladung, ungleichmäßiges Sichtfeld und macht die Verhältnisfluoreszenz zur genauesten Methode zur Bestimmung intrazellulärer Ionenkonzentrationen. Noch wichtiger ist, dass PTI RatioMaster schnell genug ist, um wichtige dynamische Informationen über Ionenkonzentrationen und Wechselwirkungen mit anderen Molekülen, Medikamenten oder zugesetzten Reagenzien zu liefern.
Der PTI RatioMaster ist in der Lage, Fluoreszenzmessungen im dynamischen Verhältnis im Millisekundentakt durchzuführen. Eine Xenonbogenlampe sorgt für eine hochintensive, kontinuierliche Breitbandbeleuchtung. Wechselnde Anregungswellenlängen werden durch einen computergesteuerten Hochgeschwindigkeits-Random-Access-Monochromator ausgewählt, der mit einem (vom Benutzer spezifizierten/versorgten) invertierten oder aufrechten Fluoreszenzmikroskop mit einem Flüssiglichtleiter gekoppelt ist. Das emittierte Licht wird von der Probe gesammelt und durch ein Photometer mit einer beidseitig verschiebbaren Blende und einem Betrachtungsokular zu einem schaltbaren Analog-/Photonenzähl-Photomultiplier-Detektor geleitet. Die analoge Erkennung wird verwendet, wenn das emittierte Licht relativ intensiv ist; niedrige Lichtwerte werden durch Photonenzählung erfasst. Alle Systemfunktionen sind computergesteuert. Die Daten werden von einer proprietären Windows FelixGX-basierten, fortschrittlichen Fluoreszenzsoftware gesammelt und analysiert.
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